Acridine orange ,吖啶橙,是一种细胞核荧光染料,具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA 和 RNA 染色。它与细胞中 DNA 和 RNA 结合量存在差别,可发出不同颜色的荧光,与 DNA 结合发绿色荧光,与 RNA 结合发桔黄色或桔红色荧光。这一特性使得它常被用于检测细胞周期,也可用于检测细胞溶酶体。
产品信息:
化学名:Acridine orange
分子式: C17H20ClN3
分子量: 301.82
CAS 号码:65-61-2
实验操作:
方法一:
1.收集细胞(采用流式细胞仪检测时,应先固定细胞),用PBS 清洗细胞1 次,计数并调节细胞浓度至106/ml。
2.取适量的细胞悬液,加入AO 染色液(1mg/ml),使AO 终浓度为8.5~17μg/ml,轻轻混匀。
3.室温避光染色15~20min,滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
4.荧光显微镜下观察(激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm),计数并拍照。
方法二:
1. Acridine orange 的推荐工作浓度为 1 μg/ml,使用前可先溶于纯水配制成浓度为 100 μg/ml 的染色储备液。
2. 对于贴壁细胞或细胞爬片:先吸除培养基,用 PBS 清洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞,加入新的 PBS;如需观察全部细胞特性,保留未贴壁细胞,可直接在培养基中加入染色液。
3. 对于悬浮细胞:可直接加入工作液或离心收集细胞后在 PBS 中加入染色液。
4. 推荐的染色孵育时间为 5-15 分钟。但由于不同细胞对 Acridine orange 的摄取能力不同,需根据具体的细胞类型摸索最佳的染色条件。
案例分析:
注意事项:
荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。